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硝酸纖維素膜NC膜
用于生物學(xué)試驗的材料
硝酸纖維素膜(nitrocellulose filter membrane，簡(jiǎn)稱(chēng)NC膜)，在膠體金試紙中用做C/T線(xiàn)的承載體，同時(shí)也是免疫反應的發(fā)生處。NC膜是生物學(xué)試驗中最重要的耗材之一。
基本信息
| 中文名 | 硝酸纖維素膜NC膜 |
| 外文名 | nitrocellulose filter membrane |
| 原理 | 勻漿配比 |
| 供應商 | PALL(美國) |
生產(chǎn)原理
滾筒鋪膜
配好的勻漿通過(guò)滾筒，形成了一張薄膜，平攤在十分光滑的平面載體上。過(guò)程與造紙非常相似。
成型
當勻漿內的成型劑開(kāi)始揮發(fā)，膜逐步干燥成型。同時(shí)在這個(gè)過(guò)程中由于溫度比較高，有些廠(chǎng)家在這個(gè)過(guò)程采取了在密閉腔體內成型，同時(shí)補充配方溶液的形式，來(lái)避免一些有效成分的蒸發(fā)。
切割
通過(guò)以上步驟生產(chǎn)出來(lái)的膜是呈一個(gè)寬度極大的產(chǎn)品，寬度的大小直接和滾筒的大小相關(guān)，滾筒越大生產(chǎn)越方便，但設備的成本也越高。寬膜要經(jīng)過(guò)切割才能成為我們購買(mǎi)到的25mm或18mm（或20mm）寬的膜，而長(cháng)度上，成品卷膜和寬膜的長(cháng)度是相同的。理論上可以讓廠(chǎng)家切成你需要的任意寬度，但這樣會(huì )造成原料的浪費和人力成本的增加，后來(lái)廠(chǎng)商在和試紙生產(chǎn)廠(chǎng)家的協(xié)調過(guò)程中，綜合用料成本和生產(chǎn)便利性基本確定了上面說(shuō)的寬度，以此為標準。
從生產(chǎn)過(guò)程，我們可以得知，NC膜本身已經(jīng)添加了表面活性劑來(lái)改善親水能力，而且已經(jīng)存在有一定的緩沖系統（雖然對紙條測試影響不會(huì )很大）。
供應商
現在有銷(xiāo)售的NC膜品牌型號如下：
PALL(美國)
MILLIPORE（美國），M135（有背襯/無(wú)背襯兩種） M180（有背襯/無(wú)背襯兩種）
WHATMAN and SS，Puraband impuraband
SARTORIUS（德國），CN140
伊能（國產(chǎn)），8um 6um
泰滋德 TEST（國產(chǎn)）8um 6um
MDI（印度），8um 6um
說(shuō)到這些供應商，不得不談?wù)劙l(fā)展的歷史. SS是膜行業(yè)的鼻祖，這點(diǎn)所有的膜公司都承認。millipore，SARTORIUS和whatman都是后輩，由于SS在市場(chǎng)競爭的過(guò)程中經(jīng)營(yíng)方式落后，最后被whatman收購。就產(chǎn)品質(zhì)量來(lái)說(shuō)SS的AE99和AE98是非常優(yōu)良的。
而MDI是近年才出現的一個(gè)膜公司，可能與印度膠體金試紙生產(chǎn)行業(yè)的快速發(fā)展密切相關(guān)，其所有的產(chǎn)品都是在印度生產(chǎn)，經(jīng)營(yíng)者為父子兩人，父親負責技術(shù)，兒子進(jìn)行經(jīng)營(yíng)。
國產(chǎn)膜伊能主要特點(diǎn)成本較低，性能與一些進(jìn)口膜很接近，經(jīng)過(guò)一些有針對性的優(yōu)化后可以用在HCG產(chǎn)品的生產(chǎn)。但不是所有的工廠(chǎng)都能購輕易的完成這個(gè)優(yōu)化工作。膜的國產(chǎn)化是一個(gè)趨勢，但進(jìn)口廠(chǎng)家要實(shí)現國產(chǎn)化還面臨很大的問(wèn)題，其中廠(chǎng)房設備的搬遷就是一個(gè)非常大的問(wèn)題。
幾家供應商的國內聯(lián)絡(luò )人和技術(shù)支持分別是
PALL（美國），Mr Xiaoliang Tang, Dong Wang
MILLIPORE（美國），Mrs Yang，harry
WHATMAN and SS，Clark，kevin
SARTORIUS（德國），Mr Xu，Iric
伊能（國產(chǎn)），connie，Mr Yang
泰滋德 TEST（國產(chǎn)）Mr li
MDI（印度），Ashawant Gupta
銷(xiāo)售模式都是直銷(xiāo)式，少量購買(mǎi)需通過(guò)代理商購買(mǎi)。價(jià)格上PALL、MILLIPORE與WHATMAN相當，SARTORIUS便宜一些，國產(chǎn)膜更便宜一些。印度膜和SARTORIUS價(jià)格相同。在科研市場(chǎng)，PALL、MILLIPORE使用最多。生產(chǎn)客戶(hù)中，MILLIPORE，HATMAN，SARTORIUS占有量相當，伊能現在也開(kāi)始有一些工廠(chǎng)客戶(hù)了，MDI量最小投訴也最多。
膜的選擇
以上談了該行業(yè)的一些發(fā)展現狀，那么我們大致了解后，回到最關(guān)心的問(wèn)題，如何選擇膜？經(jīng)常會(huì )遇到的問(wèn)題是，我是做**項目的，我該選擇那類(lèi)膜？
這里涉及到一個(gè)膜的分類(lèi)標準問(wèn)題，一個(gè)供應商可能提供這個(gè)膜是8um，但另一個(gè)供應商告訴你膜是135s的。這之間的區別與聯(lián)系是什么？
um指的是膜孔徑，而從上面膜的生產(chǎn)過(guò)程，我們可以看出，膜的孔徑實(shí)際上是沒(méi)有辦法界定的。由于干燥成型等過(guò)程的非絕對均一，膜的孔徑也是非均一的。膜孔徑的說(shuō)法實(shí)際上是沿用了一直以來(lái)的一個(gè)形象稱(chēng)呼。而以秒為單位的定義為，每4cm膜，水的層析時(shí)間是***s.該單位已經(jīng)越來(lái)越被各大廠(chǎng)商所接受，成為了一個(gè)通用的比較標準。以下我們將采用s單位來(lái)進(jìn)行交流。
換算情況大致為：8um=135s；6um=180s
不同秒數的膜對反應有什么影響呢？
首先，我們分析一下液體在膜上的運動(dòng)過(guò)程。一張長(cháng)度為4cm的膜，每隔1cm做一個(gè)標記，當液體運動(dòng)過(guò)標記處時(shí)記錄時(shí)間點(diǎn). 那么你將會(huì )發(fā)現液體在膜上的運動(dòng)是呈減速前行的。而兩張不同秒數的膜（例如135s， 180s）在同一時(shí)間標記點(diǎn)處的運動(dòng)速度不同。這個(gè)試驗用清水做不好觀(guān)察，可以考慮用色素水溶液，非常明顯。
那么從這個(gè)試驗可以看出，在通過(guò)同一T線(xiàn)噴點(diǎn)位置時(shí)，金溶液通過(guò)的速度是快速膜>慢速膜。那么通過(guò)速度越快和包被在T線(xiàn)的物質(zhì)反應時(shí)間也就越短，讀數快，那么靈敏度也就越低。反之，反應時(shí)間長(cháng)，讀數慢，也就靈敏度高。同時(shí)還有一個(gè)問(wèn)題是，反應時(shí)間越長(cháng)，發(fā)生非特異性結合的可能性就越大，所以過(guò)長(cháng)時(shí)間的反應不一定就能夠真正的提升靈敏度。所以這里就有一個(gè)讀數時(shí)間/反應靈敏度/非特異性結合的均衡。
其實(shí)我們并沒(méi)有那么多選擇。經(jīng)過(guò)使用實(shí)踐，各供應商一般都只提供兩個(gè)型號，就是135s和180s。雖然看到有些廠(chǎng)家的產(chǎn)品目錄上型號種類(lèi)繁多，但這兩個(gè)型號的定貨量就占了95%以上，其他型號供貨上也就遠不如這兩個(gè)型號來(lái)得順利。135s一般用在雙抗體夾心法，180s一般用在競爭法. 你所要做的是，先選擇其中的一個(gè)型號，然后比較不同供應商同一個(gè)型號的差異，由于前面說(shuō)的添加配方與你的試驗條件配合的不同，這個(gè)差異可能大也可能小。具體要根據試驗結果來(lái)確定最后的選擇。我個(gè)人不建議地毯式的測試不同規格/不同廠(chǎng)家的膜，這樣成本高，成功的幾率也小。
質(zhì)控方式
本節適合用膜量較大的公司用戶(hù)參考。對于一卷膜可以用上幾個(gè)月的用戶(hù)來(lái)說(shuō)，廠(chǎng)家的質(zhì)控標準已經(jīng)完全能滿(mǎn)足你的要求，而不需要自己再做相關(guān)的質(zhì)控。
膜的質(zhì)控雖屬于原輔料QC職能，但由于其專(zhuān)業(yè)性強，一般都由小樣調試人員來(lái)執行。膜入原料庫后需要進(jìn)行如下檢驗工作：
1. 查收COA
在購買(mǎi)時(shí)，供應商會(huì )隨產(chǎn)品為每個(gè)lot的膜提供一張紙質(zhì)的出廠(chǎng)質(zhì)量證書(shū)，該證書(shū)被稱(chēng)為COA。如果你已經(jīng)購買(mǎi)某一批次的膜，而沒(méi)有索取相應的證書(shū)，如果有需要可提供批號向廠(chǎng)家要求補發(fā)。其實(shí)在很多行業(yè)都有廠(chǎng)商為自己的產(chǎn)品附上COA的習慣。
COA一般只提供給大客戶(hù)，對小客戶(hù)是沒(méi)有意義的。其內容主要是廠(chǎng)家在產(chǎn)品出廠(chǎng)時(shí)做過(guò)一些測試的羅列。作用可以理解為質(zhì)量憑證和測試數據參考。
2. 檢查物理性能
膜的物理性能主要是2個(gè)參數，膜厚度和寬度。長(cháng)度不需要檢測。使用中可以關(guān)注長(cháng)度上是否有斷面重接現象，斷面多費料則多，少數發(fā)生。厚度，由螺旋測微尺，選擇幾個(gè)測量點(diǎn)檢測后算平均。膜生產(chǎn)的必測參數。主要表現為厚度不均勻影響生物原料在膜上的擴散性能，點(diǎn)出來(lái)的C/T線(xiàn)寬窄不一，另外也影響爬速。寬度，普通直尺測量。物理性能一般都不會(huì )有什么大問(wèn)題。畢竟檢測標準客觀(guān)，易把握。沒(méi)有條件執行的廠(chǎng)家可省略。
3. 跑水性能
樣本采用含有有色食用色素的水溶液，目的是容易觀(guān)測，需制作一個(gè)簡(jiǎn)易支架。
操作：注入足夠溶液到下部槽內，將不同批次膜每隔1cm做一次標記（總長(cháng)大于4cm）并放到傾斜支架，整個(gè)支架下端放入溶液槽，膜開(kāi)始吸液，計時(shí)。記錄每個(gè)標記處的通過(guò)時(shí)刻，并與對照組比較。跑板時(shí)，理論上溶液呈水平線(xiàn)形式上吸，觀(guān)測是否有波浪傾斜或包圍潤濕等反常現象。
4. 點(diǎn)樣測試
C/T線(xiàn)出線(xiàn)時(shí)間，其他試驗條件相同情況下，記錄和比較C/T線(xiàn)出現時(shí)間是否與對照有差異。
靈敏度，比較不同樣本濃度情況下，T線(xiàn)的變化是否和對照組同。一般每批次膜取前端一段用來(lái)測試即可。由于制造過(guò)程的不均一性，不同批號的靈敏度會(huì )有一定差異，當大批量使用時(shí)，這種差異影響是非常大的，那么就要按照靈敏度表現將不同批號的膜進(jìn)行分類(lèi)。在膜的STOCK中要能夠輕易的分辨出來(lái)。當進(jìn)入后期生產(chǎn)調用時(shí)，就能根據這些分類(lèi)，按照訂單要求取用不同批號的膜，或者用強靈敏度的原料和差靈敏度的膜來(lái)搭配。
關(guān)于膜的批內差。批內差是肯定存在的，只是差距大小的問(wèn)題，依據一般的測試條件是很困難獲得詳細的數值，因為你不可能對每一卷膜的每一段都做詳細的測試。減小膜批內差的最有效方法是不購入邊緣膜帶。前面說(shuō)過(guò)膜的生產(chǎn)方式，生產(chǎn)出的半成品是寬幅很大的一個(gè)膜面，要通過(guò)截面裁切才能獲得25mm或者20mm的寬度。那么就有中間部分，和邊緣部分之分。越靠近中間部分，膜的均勻性越好，邊緣部分則相對要差，就造成了批內差。一般可以通過(guò)COA獲得具體位置信息，例如MILLIPORE就在切割后用字母A，B，C……來(lái)表示切出的窄膜在寬幅膜中的位置。
如果是試用某個(gè)型號的膜小樣，還需要在以上檢測后加入膜加速老化試驗，包括膜單獨的老化試驗和點(diǎn)好膜后產(chǎn)品的老化試驗，具體試驗方法請參看我以前寫(xiě)的研發(fā)思路一文。
應用技巧
從本節開(kāi)始，我們開(kāi)始對膜進(jìn)行深入討論和談一些應用技巧。
1. 蛋白與膜的結合原理
兩條假說(shuō)，都表明其結合過(guò)程分為兩步，首先結合和后面長(cháng)時(shí)間結合。由于結合原理的不明確性，導致在這方面的工作非常依賴(lài)實(shí)踐經(jīng)驗。
2. 膜對結合的影響
1）膜孔徑
有些技術(shù)人員傾向使用膜孔徑來(lái)區分不同的膜，但是請注意這只僅僅限于同一廠(chǎng)家的產(chǎn)品，如果是不同廠(chǎng)家的產(chǎn)品，這種比較是無(wú)意義的。膜孔徑與層析速度的關(guān)系，已在上文描述。隨著(zhù)膜孔徑減小，膜的實(shí)際可用表面積遞增，膜結合蛋白的量也遞增. 估量表面積的參數為表面積比率（實(shí)際可用表面積與所用膜平面積的比率）。
另外，膜孔徑越小，層析速度也越小，那么金標復合物通過(guò)T線(xiàn)的時(shí)間也就越長(cháng)，反應也就越充分。
綜合以上兩點(diǎn)，結論為膜孔徑越小靈敏度越高。但是同時(shí)也減慢了跑板速度，增加了非特異性結合的機會(huì )，也就是假陽(yáng)性越高。所以要按照試驗結果挑選適合實(shí)際項目的膜，找到合適的平衡點(diǎn)。
2）不同廠(chǎng)家的膜差異
這個(gè)差異主要來(lái)源于兩點(diǎn)：
1> 生產(chǎn)膜時(shí)，使用的聚合物和表面活性劑的來(lái)源，類(lèi)型，數量不同。同理，在膜處理中這兩類(lèi)物質(zhì)一般會(huì )對性能產(chǎn)生較大影響。 2> 處理過(guò)程不同。
3. 生物原料，緩沖溶液的試劑和配方
1）生物原料，作為CT線(xiàn)的生物原料使用情況各異，所以這里只做略述。
首先，單克隆抗體與膜的結合優(yōu)于多克隆抗體，主要時(shí)由于多克隆抗體有很多不同的表面位點(diǎn)，而各位點(diǎn)與膜的最佳結合條件都有細微的差別，毫無(wú)疑問(wèn)就增加了優(yōu)化難度。其次，分子量越大，蛋白越難結合到固相材料上。
2）緩沖液
大家最關(guān)心的可能就是希望獲得一個(gè)性能優(yōu)良的配方，包括緩沖液，封閉液等等處理溶液配方。
其實(shí)我也無(wú)法提供給你一個(gè)萬(wàn)用配方清單。因為不同的反應體系需要不同的配方來(lái)支持，而不同機構的反應體系又有差異。想獲”魚(yú)”先學(xué)”漁”.。為了不誤導大家，我在下面涉及到配方的問(wèn)題上，僅提供思路，具體配方請自己摸索。
緩沖液的構成一般是：PBS（或其他緩沖體系）+作用物質(zhì)（針對某一特定問(wèn)題）+PH調整. 我在參考過(guò)以前的各種資料后，個(gè)人意見(jiàn)為配方原則為宜簡(jiǎn)不宜繁，根據自己的需要添加作用物質(zhì)，原來(lái)的很多需要添加的作用物質(zhì)，由于膜制造技術(shù)的改進(jìn)已經(jīng)不再需要。
推薦的緩沖體系為0.01M PBS PH7-7.2，該緩沖體系對多種抗原抗體都有良好的適應性。
作用物質(zhì)的情況大致羅列如下：
少量NACL，減少信號強度，消假陽(yáng)。
表面活性劑（TW20，TX100），增加親水力，可避免線(xiàn)條中空現象，也可增色。
糖，保護劑，減緩老化速度，也可以增加親水力同上。
調PH到某個(gè)位置，可以消假陽(yáng)。
4. 點(diǎn)樣環(huán)境
環(huán)境濕度對點(diǎn)膜過(guò)程非常重要。最佳濕度一般在45-65%。濕度過(guò)低，膜上容易聚集靜電荷，點(diǎn)膜容易出現散點(diǎn)，導致測試會(huì )出現疏水斑。濕度過(guò)高，膜上毛細作用加強，點(diǎn)膜容易引起CT線(xiàn)變寬甚至擴散。為了保證點(diǎn)樣時(shí)膜濕度的均一性，一般在點(diǎn)樣前把膜放到該濕度條件下平衡一段時(shí)間。
5. 點(diǎn)樣儀器與膜面情況的關(guān)系
目前有兩種點(diǎn)樣方式，劃膜式和非接觸點(diǎn)膜式。非接觸點(diǎn)膜式優(yōu)于劃膜式，進(jìn)口劃膜式優(yōu)于國產(chǎn)劃膜式。
因劃膜式為軟管將抗體劃到膜表面，而膜本身的物理性質(zhì)為軟脆，劃管會(huì )在其表面留下印痕。進(jìn)口的劃膜機由于使用的材料和控制系統較好，所以留下的劃痕較輕，而國產(chǎn)儀器較差，留下的劃痕也就比較嚴重。劃痕容易對層析的金標復合物形成阻力，導致假陽(yáng)性。同時(shí)容易出現跑板時(shí)在T線(xiàn)位置出現若有若無(wú)一條細線(xiàn)（鬼線(xiàn)），而跑板結束后鬼線(xiàn)消失的奇怪現象。
6. 膜的寬度與點(diǎn)樣位置
膜的寬度一般有18mm（or 20mm）和25mm兩種，分別使用在做測試條和做測試板上。然而，不同的T線(xiàn)點(diǎn)樣位置將帶來(lái)不同的靈敏度。點(diǎn)樣位置上移，金標復合物通過(guò)T線(xiàn)位置時(shí)速度變慢，反應時(shí)間增加，靈敏度升高。反之靈敏度降低。這個(gè)方法可以用來(lái)改變靈敏度和消除假陽(yáng)性。
7. 溶液在膜上的擴散
溶液在膜上的點(diǎn)樣量一般情況下為1ml/cm。溶液在膜上的擴散是趨向兩端的，噴點(diǎn)上去的是均勻的抗體溶液，但當干燥時(shí)線(xiàn)條邊緣的干燥速度高于中間，中間的抗體會(huì )不斷向兩邊擴散，所以干燥后抗體是向線(xiàn)條的兩端聚集的。一般情況下不影響你的試驗。如果你發(fā)現線(xiàn)條出現兩端紅，中間淡的現象，就要考慮這個(gè)問(wèn)題了。可以加如上面說(shuō)的作用物質(zhì)來(lái)解決。
8. 點(diǎn)膜前后的封閉作用
從供應商處購買(mǎi)回的膜基本上都是已經(jīng)優(yōu)化處理好的，直接點(diǎn)膜就可使用。然而我們還是經(jīng)常會(huì )遇到關(guān)于封閉的討論。其實(shí)封閉不象大家認為的那樣，一封閉什么問(wèn)題都解決了. 老問(wèn)題走了新問(wèn)題又來(lái)了，而且更麻煩，我要說(shuō)的是慎用封閉。我極其反對點(diǎn)膜前封閉的做法。原因為廠(chǎng)家在生產(chǎn)膜時(shí)候，各種配方是混合加入原漿的。而點(diǎn)膜前封閉時(shí)要將膜浸泡在封閉液內，必然擾亂了膜內正常的物質(zhì)分布。由此引發(fā)了許多問(wèn)題，也降低了工作效率。也有廠(chǎng)家遇到不封閉就無(wú)法包被上膜的問(wèn)題，其實(shí)可以通過(guò)其他辦法來(lái)解決，封閉必然是下測。
我經(jīng)常使用的封閉手法有兩種：流動(dòng)封閉，將作用物質(zhì)處理在樣品墊上。膜上定點(diǎn)封閉，將作用物質(zhì)配成溶液噴點(diǎn)在膜的特定位置上。該方法需要使用BIODOT的AIRJET噴頭，可以將不合格的半成品大板重新復活。只要是將封閉做在了膜上，就必然會(huì )對產(chǎn)品的穩定性造成影響，具體的影響程度要通過(guò)穩定性測試來(lái)評判。
9. 膜的儲存
剛生產(chǎn)出的膜一般含有5-10%的水分。關(guān)于膜的老化機理，有個(gè)理論支持，不過(guò)爭議比較大。理論認為：膜的老化是因為膜上的水分蒸發(fā)，使膜變得疏水，帶電荷并變脆。儲存膜一般要求是避光，密封，過(guò)干或過(guò)濕都不利。在這種保存條件下，一般可以放置兩年。但是如果膜上做了封閉處理，就要根據具體試驗情況來(lái)判斷了。有些膜由于生產(chǎn)工藝的問(wèn)題，使用后靈敏度會(huì )在一段時(shí)間內發(fā)生變化，遇到這種問(wèn)題，就需要在點(diǎn)膜后放置一段時(shí)間，待穩定后方可進(jìn)入調試生產(chǎn)。
硝酸纖維素膜NC膜
規格: 15X20cm
孔徑: 0.45μm
保存: 5-15℃密封保存，保質(zhì)期一年
產(chǎn)品簡(jiǎn)介: 本品外觀(guān)潔白，膜正面呈光澤，與水接觸應立即浸潤，不能立即浸潤老者視為失活，不能點(diǎn)樣，膜面有花斑或有粉性結構皆視為次品。用于轉移電泳，宜選孔經(jīng)0.22或0.45，以保證膜的強度，并減少穿透損失，硝纖膜過(guò)份干燥時(shí)脆，濕時(shí)有彈性，操作時(shí)室內應保持中常溫度，避免過(guò)份干燥，防止發(fā)脆，本品靜電吸附膜的親水性好，滲濾時(shí)間適中，蛋白吸附力強，轉膜的蛋白集中而不擴散，顯色的靈敏度和特異性高，背景低。
應用舉例
1.分子雜交
固相雜交包括膜上印跡雜交和原位雜交。前者包括三個(gè)基本過(guò)程：第一，通過(guò)印跡技術(shù)將核酸片段轉移到固相支持物上；第二，用標記探針與支持物上的核酸片段進(jìn)行雜交；第三，雜交信號的檢測。
用探針對細胞或組織切片中的核酸雜交并進(jìn)行檢測的方法稱(chēng)之為核酸原位雜交。某特點(diǎn)是靶分子固定在細胞中，細胞固定在載玻片上，以固定的細胞代替純化的核酸，然后將載玻片浸入溶有探針的溶液里，探針進(jìn)入組織細胞與靶分子雜交，而靶分子仍固定在細胞內。例如。可用特異性的細菌、病毒的核酸做為探針對組織、細胞進(jìn)行原位雜交，以確定有無(wú)該病原體的感染等。原位雜交不需從組織中提取核酸，對于組織中含量極低的靶序列有極高的敏感性，在臨床應用上有獨特的意義。下面以放射性標記探針與固定在NC膜上的核酸進(jìn)行雜交為例，雜交反應操作如下：
① 配制所需試劑
② 將含靶核酸的NC膜漂浮于6×SSC液面，使其由下至上完全濕潤，并繼續浸泡2分鐘。
③ 將濕潤NC膜裝入塑料袋中，按0.2ml/cm2的量加入預雜交液，盡可能擠出氣泡，將袋封口，置68℃水浴1-2小時(shí)或過(guò)夜。
④ 將雙鏈探針做變性處理使成單鏈，即于100℃加熱5分鐘，然后立即置冰浴使驟冷。
⑤ 從水浴中取出雜交袋，剪去一角，將單鏈探針加入，盡可能將袋內空氣擠出去，重新封口，并將雜交袋裝入另一個(gè)干凈的袋內，封閉，以防放射性污染。
⑥ 將雜交袋浸入68℃水浴，溫育8-16小時(shí)。
⑦ 取出雜交袋，剪開(kāi)，取出濾膜迅速浸泡于大量2×SSC和0.5%SDS中，室溫振蕩5分鐘，勿使濾膜干燥。
⑧ 將NC膜移入盛有大量2×SSC和0.1%SDS溶液的容器中，室溫漂洗15分鐘。
⑨ 將NC膜移入一盛有大量0.1×SSC和0.5%SDS溶液的容器中，37℃漂洗30分鐘至1小時(shí)。
⑩ 將NC膜移入一盛有新配0.1×SSC和0.5%SDS溶液的容器中，68℃漂洗30分鐘至1小時(shí)。
⑾ 取出濾膜，用0.1×SSC室溫稍稍漂洗，然后置濾紙上吸去大部分液體，待做雜交信號的檢測。
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教育學(xué)，作為一門(mén)研究教育現象、教育問(wèn)題及其規律的科學(xué)，是研究如何培養人的科學(xué)。它廣泛存在于人類(lèi)生活中，通過(guò)研究教育現象和教育問(wèn)題，揭示教育的一般規律。教育學(xué)的任務(wù)是探討、揭示教育規律，闡明各種教育問(wèn)題，建立教育理論體系。 19世紀中葉以后，馬克思主義的產(chǎn)生、近代心理學(xué)、生理學(xué)的發(fā)展以及現代生產(chǎn)和科學(xué)
沙特阿拉伯王國（阿拉伯語(yǔ)：????????????????，英語(yǔ)：Kingdom of Saudi Arabia），通稱(chēng)沙特阿拉伯（Saudi Arabia），簡(jiǎn)稱(chēng)沙特。沙特位于阿拉伯半島。東瀕波斯灣，西臨紅海，同約旦、伊拉克、科威特、阿聯(lián)酋、阿曼、也門(mén)等國接壤，并經(jīng)法赫德國王大橋與巴林相接。海岸線(xiàn)
迦瑪爾·阿卜杜爾·納賽爾（阿拉伯語(yǔ)：???? ??? ???????/英語(yǔ)：Gamal Abdel Nasser，1918年1月15日–1970年9月28日），是埃及的第二任總統，前任為納吉布，他被認為是歷史上最重要的埃及領(lǐng)導人之一。
尚可名片
這家伙太懶了，什么都沒(méi)寫(xiě)！
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