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巰基
具有特殊生理功能的基團
基本信息
| 中文名 | 巰基 |
| 別名 | 氫硫基；硫醇基 |
| 外文名 | sulfhydryl group |
| 化學式 | —SH |
| 性質 | 具有臭味，弱酸性、易被氧化 |
| 拼音 | qiú jī |
收起
介紹
性質：具有臭味，弱酸性、易被氧化。
巰基與二硫鍵的相互轉化
體內含有巰基的功能蛋白主要是通過巰基與二硫鍵的相互轉化來實現(xiàn)其功能的。在體內和人工條件下 , 二者之間實現(xiàn)著互相轉化的過程。在體內自然狀態(tài)下 , 二硫鍵與巰基的相互轉化主要是通過巰基 /二硫鍵氧化還原酶的催化而實現(xiàn)的。天然二硫鍵的形成是許多蛋白正確折疊中的限速步驟 , 在穩(wěn)定蛋白質構象和保持蛋白質活性方面起重要作用。在體外人工環(huán)境下 , 從氨基酸水平來看 , 半胱氨酸在堿性溶液中易被氧化形成二硫鍵 , 生成胱氨酸。氧化和還原劑均可打開二硫鍵。在研究蛋白質結構時 , 氧化劑過甲酸可定量拆開二硫鍵 , 生成相應磺酸。還原劑如巰基乙醇、巰基乙酸也能拆開二硫鍵 ,生成相應巰基化合物。由于半胱氨酸中巰基很不穩(wěn)定 ,極易氧化 , 因此利用還原劑拆開二硫鍵時 , 往往進一步用碘乙酰胺、氯化芐、N-乙基丁烯二亞酰胺和對氯汞苯甲酸等試劑與巰基作用 , 將其保護起來 , 防止其重新氧化。
含巰基的有機物
檢測方法
1. RP-HPLC法測定巰基含量
采用色譜柱Kromasil-C18 (250×4.6mm, 5μm)，流動相A(0.1%TFA)和流動相B（甲醇）梯度洗脫：流動相B 40%~80%，0~10min，然后80% B保持5min，流速0.8mL/min，檢測波長327nm，得到NTB標準曲線y=3.67059x+0.14123，回收率101.9%，RSD=l.17%，從而建立了一種高靈敏度巰基檢測方法。
2. 采用分子熒光光譜法作為反應條件，用反相高效液相色譜梯度洗脫法測定巰基
用OPA、丹酰氯、茚三酮與半胱氨酸反應，測其可見紫外吸收光譜及熒光光譜；在不同PH、溫度、反應時間條件下，用OPA與半胱氨酸反應測其熒光度；分別吸收0.1mmol/L半胱氨酸溶液0、20、40、60、80、100 μl，各加入10 μlHO,室溫下反應30min，然后加熱蒸干，殘渣用200μl OPA衍生液，定容至5 ml，4 min時測其熒光光譜。取pH8.4的硼酸緩沖溶液 5μl，混合10次；加入OPA衍生液2μl，混合進樣走HPLC。梯度條件：洗脫液B所占比例0min為0，17min線性增加至60%，17.5min線性增加至100%，20min洗脫結束。激發(fā)波長為340nm,熒光檢測波長為450nm。
3.柱前衍生高效液相色譜-紫外檢測法
以tris(2-carboxylethyl) – phosphine (TCEP)為還原劑，7–fluorbenzo–2–oxa –1,3– diazole– 4-sulfonate(SBD-F)為衍生劑，N-乙酰半胱氨酸為內標，C8色譜柱分離，流動相為甲醇 -磷酸鹽緩沖液（pH =3. 0）,梯度洗脫 ,385 nm處檢測。線性范圍為8. 3～1042. 6 μmol/L,最低檢測限為 0.42μmol/L,日內精密度為1.67%～1.86%,日間精密度為 2.08%～3.06 %,平均回收率為 98.1%～103.2 %。
4. 電化學脫附與熒光技術聯(lián)用
5.拉曼光譜法
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