藥敏試驗（用藥敏實(shí)驗進(jìn)行藥物敏感度的測定）
次瀏覽 | 更新時(shí)間：2023-05-19
來(lái)源 ：網(wǎng)絡(luò )整理
精選百科
本文由作者推薦
藥敏試驗
用藥敏實(shí)驗進(jìn)行藥物敏感度的測定
用藥敏實(shí)驗進(jìn)行藥物敏感度的測定，以便準確有效的利用藥物進(jìn)行治療。目前，臨床微生物實(shí)驗室進(jìn)行藥敏試驗的方法主要有紙片擴散法，稀釋法（包括瓊脂和肉湯稀釋法），抗生素濃度梯度法（E-test法），和自動(dòng)化儀器等。
基本信息
| 中文名 | 藥敏試驗 |
| 外文名 | Antimicrobial susceptibility test |
| 定義 | 體外測定藥物抑菌或殺菌能力試驗 |
| 操作方法 | 藥敏片法等 |
| 作用 | 進(jìn)行藥物敏感度的測定 |
| 簡(jiǎn)稱(chēng) | AST |
| 試驗方法 | 紙片擴散法，稀釋法 |
| 方法 | 紙片擴散法等 |
收起
簡(jiǎn)介
體外抗菌藥物敏感性試驗簡(jiǎn)稱(chēng)藥敏試驗（AST），是指在體外測定藥物抑菌或殺菌能力的試驗。
根據美國國家臨床實(shí)驗室標準化委員會(huì )(NCCLS)近期推薦的標準，對非苛氧菌（腸桿菌科細菌、銅綠假單胞菌、和其他非腸科桿菌、葡萄球菌屬細菌、腸球菌屬細菌）和苛氧菌（嗜血桿菌屬細菌、淋病奈瑟菌、肺炎鏈球菌和其他鏈球菌）選擇常規藥敏試驗的首選藥物（A組抗生素）或臨床使用的主要抗生素（B組抗生素）進(jìn)行藥敏試驗。
抗菌藥對細菌性傳染病的控制起到了非常重要的作用，但由于養殖過(guò)程中不科學(xué)的、盲目的濫用抗菌藥，很多致病性細菌產(chǎn)生了耐藥性，使得抗菌藥對細菌性疾病的控制效果越來(lái)越差，不但造成藥物浪費，而且還延誤病情，給養殖戶(hù)造成了很大的經(jīng)濟損失。
隨著(zhù)新型致病菌的不斷出現，抗菌藥的防治效果越來(lái)越差。并且各種致病菌對不同的抗菌藥物的敏感性不同，同一細菌的不同菌株對不同抗菌藥物的敏感性也有差異。長(cháng)期以來(lái)，各種致病菌耐藥性的產(chǎn)生使各種常用抗菌藥物往往失去藥效，以及不能很好的掌握藥物對細菌的敏感度，所以一個(gè)正確的結果，可供臨床醫師選用抗菌藥物的參考，并提高療效。農業(yè)部動(dòng)物檢疫所青島易邦生物工程有限公司動(dòng)物疫病診療中心總結出幾套適合基層進(jìn)行藥敏試驗的操作方法，現簡(jiǎn)單介紹如下。
分類(lèi)
紙片擴散法
該法是將含有定量抗菌藥物的濾紙片貼在已接種了測試菌的瓊脂表面上，紙片中的藥物在瓊脂中擴散，隨著(zhù)擴散距離的增加，抗菌藥物的濃度呈對數減少，從而在紙片的周?chē)纬蓾舛忍荻取Ｍ瑫r(shí)，紙片周?chē)志鷿舛确秶鷥鹊木瓴荒苌L(cháng)，而抑菌范圍外的菌株則可以生長(cháng)，從而在紙片的周?chē)纬赏该鞯囊志Γ煌囊志幬锏囊志χ睆揭蚴芩幬镌诃傊袛U散速度的影響而可能不同，抑菌圈的大小可以反映測試菌對藥物的敏感程度，并與該藥物對測試菌的MIC呈負相關(guān)。
稀釋法
稀釋法藥敏試驗可用于定量測試抗菌藥物對某一細菌的體外活性，分為瓊脂稀釋法和肉湯稀釋法。實(shí)驗時(shí)，抗菌藥物的濃度通常經(jīng)過(guò)倍比（lg2）稀釋?zhuān)芤种拼郎y菌肉眼可見(jiàn)生長(cháng)的最低藥物濃度成為最小抑菌濃度（MIC），一個(gè)特定抗菌藥物的測試濃度范圍應該包含能夠檢測細菌的解釋性折點(diǎn)（敏感、中介和耐藥）的濃度，同時(shí)也應該包含質(zhì)控參考菌株的MIC。
實(shí)驗步驟
實(shí)驗材料
普通營(yíng)養瓊脂培養基：可去生化試劑店購買(mǎi)，做不同細菌的藥敏試驗可選擇不同的培養基，如做大腸桿菌的藥敏試驗可選擇普通營(yíng)養瓊脂或麥糠凱培養基。做沙門(mén)氏菌可選擇血清培養基。
藥敏試紙：購買(mǎi)或自制（詳見(jiàn)實(shí)驗準備）。
細菌：待做藥敏試驗的細菌。
實(shí)驗準備
2.1 藥敏片的準備：購買(mǎi)或自制
2.1.1 制備方法：取新華1號定性濾紙，用打孔機打成6毫米直徑的圓形小紙片。取圓紙片50片放入清潔干燥的青霉素空瓶中，瓶口以單層牛皮紙包扎。經(jīng)15磅15-20分鐘高壓消毒后，放在37℃溫箱或烘箱中數天，使完全干燥。
2.1.2 抗菌藥紙片制作：在上述含有50片紙片的青霉素瓶?jì)燃尤胨幰?.25毫升，并翻動(dòng)紙片，使各紙片充分浸透藥液，翻動(dòng)紙片時(shí)不能將紙片搗爛。同時(shí)在瓶口上記錄藥物名稱(chēng)，放37℃溫箱內過(guò)夜，干燥后即密蓋，如有條件可真空干燥。切勿受潮，置陰暗干燥處存放，有效期3-6個(gè)月。
2.2 藥液的制備（用于商品藥的試驗）：按商品藥的使用治療量的比例配制藥液；如商品藥百病消按其說(shuō)明量治療量0.01%飲水，可按這個(gè)比例配制藥液，可取10毫克加入10毫升的水中混勻。此稀釋液即為用于做藥敏試驗的藥液。
實(shí)驗操作方法
3.1 藥敏片法
3.1.1 在“超凈臺”中，用經(jīng)（酒精燈）火焰滅菌的接種環(huán)挑取適量細菌培養物，以劃線(xiàn)方式將細菌涂布到平皿培養基上。具體方式；用滅菌接種環(huán)取適量細菌分別在平皿邊緣相對四點(diǎn)涂菌，以每點(diǎn)開(kāi)始劃線(xiàn)涂菌至平皿的1/2。然后，找到第二點(diǎn)劃線(xiàn)至平皿的1/2，依次劃線(xiàn)，直至細菌均勻密布于平皿。（另：可挑取待試細菌于少量生理鹽水中制成細菌混懸液，用滅菌棉拭子將待檢細菌混懸液涂布于平皿培養基表面。要求涂布均勻致密，直接懸液法要把菌液濃度用生理鹽水或PBS調到0.5個(gè)麥氏標準再涂布均勻。）
3.1.2 將鑷子于酒精燈火焰滅菌后略停，取藥敏片貼到平皿培養基表面。為了使藥敏片與培養基緊密相貼，可用鑷子輕按幾下藥敏片。為了使能準確的觀(guān)察結果，要求藥敏片能有規律的分布于平皿培養基上；一般可在平皿中央貼一片，外周可等距離貼若干片（外周一般可貼七片），每種藥敏片的名稱(chēng)要記住。
3.1.3 將平皿培養基置于37℃溫箱中培養24小時(shí)后，觀(guān)察效果。
3.2 牛津杯法
3.2.1 同3.1.1
3.2.2 以無(wú)菌操作將滅菌的不銹鋼小管（內徑6nm、外徑8nm、高10nm的圓形小管，管的兩端要光滑，也可用玻璃管、瓷管），放置在培養基上，輕輕加壓，使其與培養基接觸無(wú)空隙，并在小管處標記各種藥物名稱(chēng)。每個(gè)平板可放4-6支小管。待分鐘后，分別向各小管中滴加一定數量的各種藥液，勿使其外溢。置37℃培養8-18小時(shí)，觀(guān)察結果。
3.2.3 將平皿培養基置于37℃溫箱中培養24小時(shí)后，觀(guān)察效果。
3.3 打孔法：
該法較簡(jiǎn)單，成本低，易操作，比較適用于商品藥物的檢測。
3.3.1 在“超凈臺”中，用經(jīng)（酒精燈）火焰滅菌的接種環(huán)挑取適量細菌培養物，以劃線(xiàn)方式將細菌涂布到平皿培養基上。具體方式；用滅菌接種環(huán)取適量細菌分別在平皿邊緣相對四點(diǎn)涂菌，以每點(diǎn)開(kāi)始劃線(xiàn)涂菌至平皿的1/2。然后，找到第二點(diǎn)劃線(xiàn)至平皿的1/2，依次劃線(xiàn)，直至細菌均勻密布于平皿。（另：可挑取待試細菌于少量生理鹽水中制成細菌混懸液，用滅菌棉拭子將待檢細菌混懸液涂布于平皿培養基表面。要求涂布均勻致密。）
3.3.2 以無(wú)菌操作將滅菌的不銹鋼小管（外徑為4毫米、孔徑與孔距均為3毫米，管的兩端要光滑，也可用玻璃管、瓷管），放置在培養基上打孔，將孔中的培養基用針頭挑出，并以火焰封底，使培養基能充分的與平皿融合（以防藥液滲漏，影響結果）。
3.3.3 加樣：按不同藥液加樣，樣品加至滿(mǎn)而不溢為止。
3.3.4 將平皿培養基置于37℃溫箱中培養24小時(shí)后，觀(guān)察效果。
結果觀(guān)察
在涂有細菌的瓊脂平板上，抗菌藥物在瓊脂內向四周擴散，其濃度呈梯度遞減，因此在紙片周?chē)欢ň嚯x內的細菌生長(cháng)受到抑制。過(guò)夜培養后形成一個(gè)抑菌圈，抑菌圈越大，說(shuō)明該菌對此藥敏感性越大，反之越小，若無(wú)抑菌圈，則說(shuō)明該菌對此藥具有耐藥性。其直徑大小與藥物濃度、劃線(xiàn)細菌濃度有直接關(guān)系。
判定標準
一、藥敏實(shí)驗的結果，應按抑菌圈直徑大小作為判定敏感度高低的標準。
抑菌圈直徑（毫米） | 敏感度 |
20以上 | 極敏 |
15~20 | 高敏 |
10~14 | 中敏 |
10以下 | 低敏 |
0 | 不敏 |
具體對于不同的菌株，及不同的抗生素紙片需參照NCCLs的標準或者CLSI標準。
二、藥物敏感實(shí)驗判定標準參考表1，多黏菌素抑菌圈；在9毫米以上為高敏，6—9毫米為低敏，無(wú)抑菌圈為不敏。
影響因素
培養基
細菌藥敏試驗所用的培養基種類(lèi)較多，多數情況下，采用WHO組織統一要求的M—H培養基，這種培養基中含有的低胸腺嘧啶是與磺胺類(lèi)藥物競爭的物質(zhì)，因此進(jìn)行的藥敏試驗效果較好。此外，還有適量的Ca、Mg，在培養基中起到觸媒的作用。但是，有些細菌對培養基中的成分有特殊的要求，特殊的菌要用特殊的培養基才能進(jìn)行藥敏試驗。例如，流感嗜血桿菌的藥敏試驗培養基用HTM瓊脂；淋球菌的藥敏試驗培養基用加5%羊血的巧克力M—H瓊脂；肺炎鏈球菌的藥敏實(shí)驗用M—H瓊脂加5%的脫纖維羊血培養基。培養基中還有適量的Ca、Mg，在培養基中起到溶酶的作用，其含量的變化，可影響氨基糖苷類(lèi)和四環(huán)素對銅綠假單胞菌的試驗結果，含量過(guò)高，抑菌圈會(huì )變小，含量過(guò)低，抑菌圈會(huì )大得不可接受。
細菌藥敏試驗的培養基厚度大約為4mm，若培養基厚度大于4mm，會(huì )使細菌出現耐藥；若小于4mm，本應耐藥的易出現敏感。所以，試驗時(shí)一定不要把藥敏紙片放在中央部位，而應均勻地排布在平皿周?chē)呐囵B基上。制作藥敏試驗的培養基用水，主要是Ca、Mg、A1等礦物質(zhì)離子，也在很大程度上影響著(zhù)藥敏試驗的結果。
試紙片
試紙片材質(zhì)的好壞，對藥物穩定性和活性有很大影響。加工藥敏試紙片的試紙一般是使用加厚型的濾紙，雜質(zhì)少，對藥物保存無(wú)太大影響。然而，臨床中很多用的是普通紙，被水浸潤后會(huì )呈堿性，并且含有大量無(wú)機離子，因此使用普通紙加工的試紙片藥物有較大的影響。藥敏紙片的pH值一般要求為中性，這樣才適合藥的活度。藥敏紙片的厚度要求大約1mm，這樣才有利于細菌的生長(cháng)和藥物的擴散速度。藥敏紙片的直徑在6．00～6．35mm之間，紙片的厚度和直徑大小都會(huì )影響藥敏試驗的結果。
含藥紙片的片間差和質(zhì)量好壞是做藥敏試驗的關(guān)鍵。一些藥敏紙片買(mǎi)來(lái)時(shí)就有抑菌環(huán)偏大或偏小的問(wèn)題，紙片之間又存在很大的片間差。因此，紙片在用前必須檢驗其片間差和準確度，只有都達到標準要求后才能使用。同時(shí)要注意紙片的保存，因為有的紙片，如青霉素類(lèi)，在保存中因為受潮濕環(huán)境的影響容易降低其藥物的活性。因此，紙片應放低溫下(-10℃)保存，同時(shí)要避免潮濕，以保持抗菌藥物的活性。盛紙片小瓶自低溫處取出應在室溫平衡至少10min后再打開(kāi)，避免冷凝水影響藥效。
細菌
由于各種菌對藥物的敏感性不同，產(chǎn)生的抑菌環(huán)大小不同，如果菌種不純，試驗中所產(chǎn)生的抑菌環(huán)大小與該菌種在純培養狀態(tài)下產(chǎn)生的抑菌環(huán)大小存在較大的差異，影響判斷結果的準確性。因此需要對各種致病菌提純后，分別進(jìn)行不同的藥敏試驗。藥敏試驗時(shí)，需要將提純后的菌種配制成一定濃度的菌液。WHO組織制定的標準是要求菌液濃度在1．5億/ml左右。若菌液濃度過(guò)高，該菌會(huì )對所有藥物產(chǎn)生耐藥；反之，菌液濃度過(guò)低，該菌會(huì )對所有藥物均敏感。最精確的方法是使用分光光度計測定新鮮培養物菌懸液的吸光度，來(lái)確定菌液濃度。國家細菌耐藥性監測網(wǎng)的三級甲等醫院，其微生物實(shí)驗室大多數用此法來(lái)確定藥敏試驗的菌液濃度。
藥敏試驗中要將菌液均勻地涂在培養基上，使細菌均勻分布，這樣才能使試驗結果不會(huì )出現較大的偏差。涂菌后15min才能貼藥敏紙片。由于涂菌后，細菌要有一段時(shí)間的適應過(guò)程，但是時(shí)間不能過(guò)長(cháng)，否則會(huì )使細菌產(chǎn)生耐藥。貼藥敏紙片時(shí)，每取一種藥敏紙片必須燒一下鑷子口，避免藥敏紙片之間相互混淆，以提高藥敏的準確性。藥物殺滅細菌存在一定的量比，藥敏試驗培養基上細菌層越厚抑菌圈就越小，反之抑菌圈就越大。根據一種藥物抑菌圈的有無(wú)或者大小，只能判斷出該藥對細菌有沒(méi)有效果，但其敏感性的高低需要通過(guò)科學(xué)嚴謹的實(shí)驗來(lái)確定。藥物的敏感程度需要根據藥敏試驗的結果，并結合以上因素做綜合分析，才能得出科學(xué)的結論，而片面地根據藥敏圈的大小來(lái)決定敏感與否，結果不夠準確。
培養時(shí)間
一般培養溫度和時(shí)間為37℃8-18小時(shí)，有些抗菌藥擴散慢如多粘菌素，可將已放好抗菌藥的平板培養基，先置4℃冰箱內2~4小時(shí)，使抗菌藥預擴散，然后再放37℃溫箱中培養，可以推遲細菌的生長(cháng)，而得到較大的抑菌圈。
應用
藥物敏感實(shí)驗后，應選擇高敏藥物進(jìn)行治療，也可選用兩種藥物協(xié)助使用，以減少耐藥菌株。在選擇高敏藥物時(shí)應考慮藥物的吸收途徑，因為藥敏實(shí)驗是藥液直接和細菌接觸，而在給禽用藥的時(shí)候，必須通過(guò)機體的吸收才能使藥物達到一定的效果，所以在給禽用藥時(shí)，高敏藥物一定要配合適宜的給藥方法，這樣才會(huì )達到好的治療效果。
藥敏試驗相關(guān)的文章
公孫止是金庸武俠小說(shuō)《神雕俠侶》中的反派人物，絕情谷谷主，武功直追“天下五絕”。他是「鐵掌蓮花」裘千尺之夫，家傳武功有閉穴功、「陰陽(yáng)倒亂刃法」和「魚(yú)網(wǎng)陣」，又從妻子處學(xué)來(lái)鐵掌功，武功直追金輪法王，裘千仞等人。公孫止為爭奪小龍女，曾與楊過(guò)三度交鋒，第三戰因裘千尺從旁指點(diǎn)楊過(guò)而落敗，閉穴功被破，更因中了
玉山鐵二（1980年4月7日出生于日本京都府城陽(yáng)市）是一位日本影視男演員。他畢業(yè)于京都府立西城陽(yáng)高中，并于1999年通過(guò)出演個(gè)人首部電視劇《麻辣女教師》正式進(jìn)入演藝圈。2001年，他參演了特攝劇《百獸戰隊牙吠聯(lián)者》。2004年，玉山鐵二首次擔任主演，出演運動(dòng)電影《功夫棒球》，在片中飾演不屈斗志。20
斯德哥爾摩（Stockholm）是瑞典的首都和最大城市，位于瑞典的東海岸，瀕波羅的海，梅拉倫湖入海處。市區分布在14座島嶼和一個(gè)半島上，70余座橋梁將這些島嶼聯(lián)為一體，因此享有“北方威尼斯”的美譽(yù)。斯德哥爾摩是瑞典政治、經(jīng)濟、文化、交通中心和主要港口，也是瑞典國家政府、國會(huì )以及皇室的官方宮殿都所在地
吳鴻本詞條是多義詞，共10個(gè)義項四川文藝出版社社長(cháng)、作家吳鴻 男 出生 中國四川（1964年——2017年6月30日），擔任四川文藝社社長(cháng)期間，曾出版過(guò)陳忠實(shí)、王蒙、阿來(lái)、麥家、虹影、韓少功等國內諸多文壇名家的重要作品。出版過(guò)阿來(lái)的非虛構名作《瞻對》，暢銷(xiāo)書(shū)《瑯琊榜》等。四川文藝出版社社長(cháng)、作家、美
尚可名片
這家伙太懶了，什么都沒(méi)寫(xiě)！
作者
