質(zhì)粒是染色體外能夠進(jìn)行自主復制的遺傳單位，包括真核生物的細胞器和細菌細胞中染色體以外的脫氧核糖核酸(DNA)分子。現在習慣上用來(lái)專(zhuān)指細菌、酵母菌和放線(xiàn)菌等生物中染色體以外的DNA分子。

所屬學(xué)科

生物化學(xué)與分子生物學(xué)

基本介紹

在基因工程中質(zhì)粒常被用做基因的載體。許多細菌除了染色體外，還有大量很小的環(huán)狀DNA分子，這就是質(zhì)粒(plasmid)（補充：部分質(zhì)粒為RNA）。質(zhì)粒上常有抗生素的抗性基因，例如，四環(huán)素抗性基因或卡那霉素抗性基因等。有些質(zhì)粒稱(chēng)為附加體(episome)，這類(lèi)質(zhì)粒能夠整合進(jìn)細菌的染色體，也能從整合位置上切離下來(lái)成為游離于染色體外的DNA分子。

已發(fā)現有質(zhì)粒的細菌有幾百種，已知的絕大多數的細菌質(zhì)粒都是閉合環(huán)狀DNA分子(簡(jiǎn)稱(chēng)cccDNA)。細菌質(zhì)粒的相對分子質(zhì)量一般較小，約為細菌染色體的0.5%～3%。根據相對分子質(zhì)量的大小，大致上可以把質(zhì)粒分成大小兩類(lèi)：較大一類(lèi)的相對分子質(zhì)量是40×106以上，較小一類(lèi)的相對分子質(zhì)量是10×106以下(少數質(zhì)粒的相對分子質(zhì)量介于兩者之間)。每個(gè)細胞中的質(zhì)粒數主要決定于質(zhì)粒本身的復制特性。

按照復制性質(zhì)，可以把質(zhì)粒分為兩類(lèi)：一類(lèi)是嚴緊型質(zhì)粒，當細胞染色體復制一次時(shí)，質(zhì)粒也復制一次，每個(gè)細胞內只有1～2個(gè)質(zhì)粒；另一類(lèi)是松弛型質(zhì)粒，當染色體復制停止后仍然能繼續復制，每一個(gè)細胞內一般有20個(gè)左右質(zhì)粒。一般分子量較大的質(zhì)粒屬?lài)谰o型。分子量較小的質(zhì)粒屬松弛型。質(zhì)粒的復制有時(shí)和它們的宿主細胞有關(guān)，某些質(zhì)粒在大腸桿菌內的復制屬?lài)谰o型，而在變形桿菌內則屬松弛型。

在基因工程中，常用人工構建的質(zhì)粒作為載體。人工構建的質(zhì)粒可以集多種有用的特征于一體，如含多種單一酶切位點(diǎn)、抗生素耐藥性等。常用的人工質(zhì)粒運載體有pBR322、pSC101。pBR322含有抗四環(huán)素基因(Tcr)和抗氨芐青霉素基因(Apr)，并含有5種內切酶的單一切點(diǎn)。

如果將DNA片段插入EcoRI切點(diǎn)，不會(huì )影響兩個(gè)抗生素基因的表達。但是如果將DNA片段插入到HindIII、BamHI或SalI切點(diǎn)，就會(huì )使抗四環(huán)素基因失活。這時(shí)，含有DNA插入片段的pBR322將使宿主細菌抗氨芐青霉素，但對四環(huán)素敏感。沒(méi)有DNA插入片段的pBR322會(huì )使宿主細菌既抗氨芐青霉素又抗四環(huán)素，而沒(méi)有pBR322質(zhì)粒的細菌將對氨芐青霉素和四環(huán)素都敏感。pSC101與pBR322相似，只是沒(méi)有抗氨芐青霉素基因和PstI切點(diǎn)。質(zhì)粒運載體的最大插入片段約為10kb(kb表示為千堿基對)。

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