熱滅活是為了去除血清中補體等對熱敏感的物質(zhì)。

解釋

血清的熱滅活是很多培養者感興趣的話(huà)題，價(jià)格不菲的血清中含有諸如生長(cháng)因子，維生素，氨基酸等珍貴物質(zhì)，而將它們置于50℃以上的溫度長(cháng)達30分鐘是完全沒(méi)有必要的。盡管如此，在大多數實(shí)驗室之中血清的熱滅活還是作為常規來(lái)執行，多數實(shí)驗者并沒(méi)有考慮熱處理對血清中的生長(cháng)因子，氨基酸等成分帶來(lái)的負面影響。

簡(jiǎn)介

根據調查，至少70%的研究者對血清的滅活僅僅是因為遵照常規操作，或者說(shuō)認為是理所當然的。常規滅活建議的溫度在45℃到62℃之間，而時(shí)間則從15分鐘到60分鐘不等。其中最常用的手法是56℃熱處理30分鐘。隨著(zhù)血清采集、處理、加工工藝的提高，許多早先認為是熱滅活的原因已經(jīng)不再成立，只有少數對血清進(jìn)行熱滅活的研究者在實(shí)驗中證實(shí)了這一步驟的有效性和必要性。

熱滅活目的是為了去除血清中補體等對熱敏感的物質(zhì)，但是在胎牛血清中對補體的滅活則明顯沒(méi)有必要。Triglia和Linscott曾對商業(yè)胎牛血清中的補體成分進(jìn)行測定，他們發(fā)現胎牛血清中含有的C1，C6僅達成年動(dòng)物血清的1-3%，而其它補體成分僅有成年動(dòng)物的5-50%，至于補體的主要成分C3在胎牛血清中則幾乎不能檢出。通過(guò)補體固定實(shí)驗，我們也在多個(gè)不同批次的胎牛血清中獲得了相似的結果。即使是在未稀釋的血清中，也未發(fā)現有明顯的溶血現象。另外，多數實(shí)驗室在培養前將培養液進(jìn)行預熱的過(guò)程，也對熱敏的補體有滅活的作用。

在對補體滅活以外，熱處理同時(shí)也對血清中可能存在的支原體具有滅活作用。多年以前，450納米孔徑的濾膜被用于加工血清時(shí)，血清中支原體的污染時(shí)有發(fā)生。針對這個(gè)問(wèn)題，HyClone首家使用100納米三層濾膜連續濾過(guò)技術(shù)，自從采用這項技術(shù)以及后來(lái)的40納米濾過(guò)技術(shù)之后，我們的血清產(chǎn)品中沒(méi)有再發(fā)現有支原體的污染，也是使得熱滅活成為不必要的另外一個(gè)原因。

Pinyopummintr等證明血清去除滅活步驟不影響牛胚胎的發(fā)育分化；有研究結果證實(shí)熱滅活步驟減弱了胎牛血清和小牛血清對細胞的促粘附作用，在用SV-BHK、BALB-3T3、CV－1、FS-4細胞對細胞粘附實(shí)驗中，熱滅活對胎牛血清的影響小于對小牛血清的影響。

我們調查了熱滅活對胎牛血清以及對其中不同細胞株生長(cháng)能力的影響。通過(guò)比較11個(gè)不同細胞株，發(fā)現其中熱滅活對6個(gè)細胞株（HBAE，MDBK，Vero，成纖維細胞，MRC-5）的生長(cháng)帶來(lái)負面影響，三個(gè)細胞株（FOX-NY，MDCK和CHO-K1）不受熱滅活的影響，而只有兩個(gè)細胞株（Balb/3T3，Sp2/0Ag14hybrid），在熱滅活之后，細胞生長(cháng)有輕微的改善。所以，在正常的操作下，熱滅活通常對細胞的生長(cháng)沒(méi)有明顯的促進(jìn)作用。

在正常操作下，熱滅活經(jīng)常給血清產(chǎn)品帶來(lái)負面的影響，對血清的加熱經(jīng)常導致血清中沉淀的產(chǎn)生，而導致的沉淀又常常被認為是微生物的污染。注意到這個(gè)現象之后，為了驗證污染的存在，或者促進(jìn)沉淀的溶解，許多培養者往往將血清放置37℃溫育。這卻往往使情況變得更糟，血清中的蛋白進(jìn)一步的析出，為了確信血清未被污染，進(jìn)行的鏡檢，無(wú)菌培養試驗，和革蘭氏染色試驗更是浪費了實(shí)驗者大量的時(shí)間和精力。

總之，多數細胞培養中血清的熱滅活并不是必要的。很多場(chǎng)合下，熱滅活并不會(huì )改善細胞的生長(cháng)，卻降低了支持細胞生長(cháng)的能力。即使在少數有促進(jìn)的情況下，其促進(jìn)的比率也是微不足道的。另外，血清的熱滅活導致的沉淀常常被認為是微生物的污染，從而給用戶(hù)和供應商都帶來(lái)不必要的麻煩。我們建議，對于那些對血清進(jìn)行滅活的用戶(hù)，需要通過(guò)試驗來(lái)證實(shí)其必要性，確定滅活的適當條件；在滅活過(guò)程中，需要嚴格認真監測，并選擇一個(gè)可重復的方案進(jìn)行操作。