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亮氨酸拉鏈
蛋白質中的結構基元
簡介
亮氨酸拉鏈
亮氨酸拉鏈
亮氨酸拉鏈（leucine zipper）是由伸展的氨基酸組成，每7個氨基酸中的第7個氨基酸是亮氨酸，亮氨酸是疏水性氨基酸，排列在螺旋的一側，所有帶電荷的氨基酸殘基排在另一側。當2個蛋白質分子平行排列時，亮氨酸之間相互作用形成二聚體，形成“拉鏈”。在“拉鏈”式的蛋白質分子中，亮氨酸以外帶電荷的氨基酸形式同DNA結合。
作用舉例
轉錄因子
酵母轉錄因子GCN4是通過亮氨酸拉鏈（bZIP）結構結合DNA的蛋白質之一，當GCN4二聚體與DNA結合時，亮氨酸拉鏈區(qū)的2個單體結合為平行的卷曲螺旋結構，而其基區(qū)由無規(guī)線團結構變?yōu)?/span>α螺旋.為探討亮氨酸拉鏈蛋白與DNA的結合機理，設計了含有GCN4亮氨酸拉鏈蛋白基區(qū)結合DNA的必需氨基酸的折疊片段，并將其克隆到Escherichia coli BL21，討論了此亮氨酸拉鏈蛋白的表達條件。在蛋白質的小量表達試驗中，重組子Escherichia coli BL21于5 mL含有50 μg/mL氨芐青霉素和34 μg/mL氯霉素的LB液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)至對數期，加入不同濃度的IPTG，繼續(xù)培養(yǎng)以誘導蛋白質的表達，在不同的時間（如：誘導前，誘導2,4,6,8 h) 取樣100 μL到1.5 mL離心管中、離心收集沉淀，將沉淀懸浮于樣品緩沖液中，用10% SDS-PAGE檢測；在10 L含氨芐青霉素和氯霉素的LB液體培養(yǎng)基中進行了大量表達，根據小量表達的試驗結果確定了IPTG的濃度和誘導時間. 結果表明：含有這種拉鏈蛋白質的重組子Escherichia coli BL21在37℃下小量培養(yǎng)時，0.1～0.8 mmol的 IPTG均可在2～10 h內誘導該蛋白質表達；而大量培養(yǎng)時，0.2 mmol和0.4 mmol的 IPTG在37℃均不可能誘導表達，只在28℃時才表達；小量培養(yǎng)和大量培養(yǎng)的最佳誘導時間為4～6 h，誘導劑 IPTG的濃度為0.2 mmol，大量表達的溫度為28℃而不是 37℃.
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